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血红蛋白的提取和分离学案

分类:高一生物教案   更新:2017/5/25   来源:网络

  1.尝试对血液中血红蛋白的提取和分离。

  2.体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法。

  3.了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的原理。

  蛋白质的各种特性的差异如分子的______和______、所带________________、溶解度、________和对其他分子的亲和力,等等,可以用来分离不同种类的蛋白质。

  一、凝胶色谱法

  1.概念:凝胶色谱法也称做__________,是根据____________的大小分离蛋白质的有效方法。

  2.原理:大多数凝胶是由________化合物构成的小球体,内部有许多贯穿的通道,当不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量____的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程______,移动速度______;而相对分子质量______的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在________移动,路程______,移动速度______。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

  3.凝胶材料:______性,______类化合物,如葡聚糖或________。

  4.具体过程:

  (1)________混合物上柱。(2)洗脱开始,______________的蛋白质______进入凝胶颗粒内;相对分子质量______的蛋白质则被排阻于凝胶颗粒之外。(3)________________的蛋白质被滞留;__________________的蛋白质向下移动。(4)相对分子质量不同的分子完全分开。(5)____________的蛋白质行程较短,已从________中洗脱出来,________________的蛋白质还在行进中。

  提示:洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液,促使蛋白质分子的差速流动。

  二、缓冲溶液

  1.作用:在________内,能够抵制外界的________对溶液____的影响,维持____基本不变。

  2.配制:通常由________溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的______就可以制得在不同________使用的缓冲液。

  三、电泳

  1.概念:带电粒子在______的作用下发生______的过程。

  2.原理:许多重要的生物大分子,如______、______等都具有________的基团,在一定pH下,这些基团会带上______或______。在电场的作用下,这些带电分子会向着与所带电荷__________移动。电泳利用了分离样品中各种分子__________以及分子本身的______、______不同,使带电分子产生不同的________,从而实现样品中各种分子的分离。

  3.分类:________凝胶电泳、__________凝胶电泳。

  在测定蛋白质相对分子质量时通常使用__________________凝胶电泳。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带________的多少以及__________等因素。而在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中,SDS能使蛋白质发生________,由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会______成单条肽链,因此测定的结果只是________的相对分子质量。同时SDS所带的大量负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量,因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别,使电泳迁移率完全取决于__________。

  四、蛋白质的提取和分离

  蛋白质的提取和分离一般分为四步:________、粗分离、______和________。

  1.样品处理及粗分离

  血液由__________和__________组成,其中红细胞最多。红细胞的组成中,除水分以外,约90%是__________。血红蛋白由______条肽链组成,包括两条__________和两条__________。其中每条肽链环绕一个__________基团,此基团可携带一分子氧或一分子__________。血红蛋白因含有________而呈现____色。

  (1)红细胞的洗涤

  ①目的:去除________。

  ②方法:采用________离心,如500 r?min-1离心2

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