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DNA的粗提取与鉴定学案

分类:高一生物教案   更新:2017/5/25   来源:网络

  DNA的粗提取与鉴定

  1.尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取。

  2.了解DNA的物理化学性质。

  3.理解DNA粗提取及DNA鉴定的原理。

  一、提取DNA

  1.提取生物大分子的基本思路

  选用一定的物理或化学方法分离具有不同__________性质的__________。对于DNA的粗提取而言,就是要利用DNA与______、______和______等在__________性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。

  2.DNA粗提取主要利用了DNA的溶解性和耐受性两个方面

  (1)利用DNA的溶解性。DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的________中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使______充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。

  在________ NaCl溶液浓度下,DNA的溶解度最小。

  此外,DNA不溶于______溶液,但是细胞中的某些蛋白质能溶于其中。利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步分离。

  (2)利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。蛋白酶能水解________,但是对______没有影响。大多数蛋白质不能忍受________ ℃的高温,而DNA在____ ℃以上才会变性。洗涤剂能够__________,但对DNA没有影响。

  二、DNA的鉴定

  在________的条件下,DNA遇________会被染成____色,因此________可以作为鉴定DNA的试剂。

  三、实验设计

  1.实验材料的选取

  原则上,凡是含有______的生物材料都可以考虑,但是,选用__________________的生物组织,成功的可能性更大。

  思考:生活在牧区的人们,采集牛、羊和马血比较方便,他们用牛、羊、马血做提取DNA的实验材料合适吗?为什么?

  2.破碎细胞,获取含DNA的滤液

  动物细胞的破碎比较容易,以鸡血为例,在鸡血细胞液中加入一定量的________,同时用________搅拌,过滤后收集______即可。如果实验材料是植物细胞,需要先用______溶解________。例如,提取洋葱的DNA时,在切碎的洋葱中加入一定的________和______,进行充分地搅拌和研磨,过滤后收集________。

  3.去除滤液中的杂质

  最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质,需要进一步提纯DNA。

  方案一:利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同,在滤液中加入NaCl,使NaCl溶液物质的量浓度为________,过滤除去______的杂质;再调节NaCl溶液物质的量浓度为________,析出______,过滤去除________的杂质;再用物质的量浓度为________的NaCl溶液溶解DNA。

  方案二:利用蛋白酶分解蛋白质,不分解DNA的特点。在滤液中加入嫩肉粉,嫩肉粉中的__________能够分解蛋白质。

  方案三:利用蛋白质和DNA的变性温度不同的特点。将滤液放在________ ℃的恒温水浴箱中保温10~15 min,过滤获得DNA滤液。

  4.DNA的析出与鉴定

  将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积______的、冷却的________(体积分数为95%),静置2~3 min,溶液中会出现__________,这就是粗提取的DNA。用玻璃棒__________搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸去上面的水分。

  取两支20 mL的试管,各加入物质的量浓度为________的NaCl溶液5 mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后,向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂

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